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我的试验是要做一个基因多个位点的多态性先提取基因组DNA然后PCR

归档日期:05-13       文本归类:多态性      文章编辑:爱尚语录

  我的试验是要做一个基因多个位点的多态性,先提取基因组DNA,然后PCR扩增目的片段,之后酶切

  我的试验是要做一个基因多个位点的多态性,先提取基因组DNA,然后PCR扩增目的片段,之后酶切

  不明白酶切的问题,酶切位点是哪里,怎么选择?我真的是新手,请高人详细解说,谢谢酶切之后测序,我很急,麻烦各位帮帮我...

  不明白酶切的问题,酶切位点是哪里,怎么选择?我真的是新手,请高人详细解说,谢谢

  如果酶切,若是你知道多态位点的序列,可以根据这个序列选择内切酶;如果不知道,那就多尝试一下识别位点是4个bp的那几个常用的内切酶吧更多追问追答追问是不是应该找切开多态位点附近的位点的酶啊?我试过dnaman ,没有找到啊追答就是找应该切开多态位点的酶。

  譬如,一段序列含有……GAATTC……,它能被EcoRI切开;而如果这个酶切位点恰好是多态位点,譬如GAATCC,那么EcoRI就切不开了,所以根据EcoRI后电泳条带可以判定基因多态性

  所以,如果你能知道多态位点的序列,那么就可以有针对性地选择内切酶;如果你不知道,那么就得通过实验来尝试追问我是在NCBI上输入rs序列号,然后就有包括多态位点的序列,用DNAMAN查过,没有多态位点附近的限制酶,怎么办?追答没有合适的酶不大可能,你换一下另一种或几种多态序列看看

  以上面的为例,你输入的是……GAATCC……没找到合适的酶,但如果输入的是……GAATTC……,那就能知道了

  万一真的没有合适的内切酶,那就只能放弃这种方法了,但可以用其它方式,譬如你设计一个引物,它的3‘端最后一个碱基就是多态位点,这样,与这个引物严格匹配的能扩增,如果多态位点有变异,那么就扩增不出来找到了三个位点的酶,另外有一个酶还没有商业化(北京NEC说的),其他两个位点找不到酶了,我用探针是不是可以啊

  我觉得这个应该不难,你做的应该不是一个全新的完全没有信息的基因吧。这样的话,你就可以通过参考已知的数据库里边的信息,找到同源序列或者其他株系的序列,然后看看大概有些什么位点,然后切来看,看能不能切到大小和预期一致的片段。在网上找到了使用方法,操作过一会,看见看几个同源序列,接下来怎么做不清楚

  酶,是限制性内切酶。每种酶会在DNA上寻找特异的碱基排列,找到后再在特定位置进行剪切,把DNA双链剪短。跑琼脂糖电泳时就会看到,含有酶切位点的DNA变小了,而不含的维持原来大小。这种多态性检测,就是通过观察片段大小判断酶切位点碱基是否有变化。最常见的识别序列是4-8个碱基的回文序列。用酶切法鉴定的多态位点必须在这个范围里,否则无法影响酶切

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